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国家三类新兽药“鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗”

2013/6/20    来源:互联网    标签:鸭传染性浆膜炎

天津瑞普生物技术股份有限公司高科分公司经过多年实验研制成功的鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗(1型RAf63株+2型RAf34株)经农业部审核,批准为三类新兽药,并于2012年10月17日核发《新兽药注册证书》。

鸭传染性浆膜炎的发病感染率可高达90%以上,肉用鸭死亡率达10%-30%,死亡率在5%-75%不等,一年四季都可发生,目前已经成为严重危害养鸭业的疾病之一,据统计,此病已经给养鸭业造成了数十亿元的直接经济损失。鸭传染性浆膜炎在我国华北地区迅速蔓延,传播速度之快、之广,危害之大,已成为政府部门、养鸭业及禽病工作者共同面对的传染性疾病。

天津瑞普生物技术股份有限公司高科分公司经过多年实验研制成功的鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗(1型RAf63株+2型RAf34株)经农业部审核,批准为三类新兽药,并于2012年10月17日核发《新兽药注册证书》。本品系用免疫原性良好的鸭疫里氏杆菌血清1型RAf63株和血清2型RAf34株分别接种于适宜培养基培养,将培养物浓缩,经甲醛溶液灭活后,按适当比例与矿物油佐剂混合乳化制成,用于预防由血清1型和2型鸭疫里氏杆菌引起的鸭传染性浆膜炎。现将该新兽药的情况简要介绍如下:

一、新兽药名称及主要成分

通用名:鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗(1型RAf63株+2型RAf34株)

主要成分与含量:本品系用1型RAf63株+2型RAf34株分别接种培养基培养,采用聚醚砜中空纤维超滤浓缩设备对抗原进行纯化与浓缩,使浓缩菌液含菌量≥6.2×1010 CPU/ml,经甲醛灭活后,加佐剂混匀。

性状:乳白色均匀乳剂油包水型(W/O)。用一清洁吸管,吸取少许疫苗滴于清洁冷水表面,除**滴呈云雾状扩散外,以后各滴均应不扩散。

二、安全检验

用5-10日龄健康易感雏鸭10羽,各颈部背侧皮下注射疫苗0.6ml(2羽份),观察14日,不出现疫苗引起的局部或全身不良反应。

三、血清学效力检验(RA1型、RA2型ELISA抗体检测)

1.材料准备

抗原制备

间接ELISA抗原制备将1型、2型鸭疫里氏杆菌分别接种到胰蛋白胨大豆琼脂平板上,分别置5%CO2培养箱37℃培养24小时。用灭菌生理盐水将细菌从平板洗下,5000r/min离心10分钟,去上清,加生理盐水洗涤直至上清液完全透明,将沉淀的细菌悬浮于少量包被液中,用超声波裂解器充分裂解后,8000r/min离心30分钟除去大的细菌碎片。测定蛋白含量,将制备好的抗原分装,-20℃保存备用。

抗原包被板制备

将制备的鸭疫里氏杆菌1型和2型抗原用0.05 mol/L,pH值9.6的碳酸盐缓冲液分别稀释成1.68μg/ml、1.87μg/ml,包被96孔聚苯乙烯酶标板,每孔100μl,4℃湿盒中放置20小时。洗液洗涤3次,用封闭液于37℃湿盒内封闭60分钟,用洗涤液洗涤3次,干燥后置4℃冰箱备用。可分别用于RA1型和RA2型抗体检测。

酶标抗体辣根过氧化物酶标记羊抗鸭二抗。使用时,作1000倍稀释。

使用液的配制

碳酸盐缓冲液(0.05 mol/L,pH值9.6,CBS)碳酸钠1.59g,碳酸氢钠2.93g,用双蒸水溶解至1000 ml,于4℃保存,不超过1个月。

磷酸盐缓冲液(0.01mol/L,pH值7.4,PBS)氯化钠8g,碳酸二氢钠0.2g,磷酸氢二钠(Na2HPO4•12H20)2.9g,氯化钾0.2g,加蒸馏水至1000ml。

洗液(含0.05% Tween-20的0.01mol/L,pH值7.4 的PBS,即PBST)Tween-20 0.5 ml,加0.01mol/L,pH值7.4的PBS至1000 ml。

封闭液(含0.5% BSA的PBST)牛血清白蛋白(BSA)0.5 g,加洗液至100ml,4℃存放,避光。

样品稀释液(含0.1% BSA的PBST)牛血清白蛋白(BSA)0.1 g,加洗液至100 ml,4℃存放,避光。

间接ELISA底物缓冲液(磷酸氢二钠-柠檬酸,pH值5.4) 0.2 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4•12H2O) 26.7ml,0.1 mol/L柠檬酸24.3 ml,纯化水49 ml。准确称取四甲基联苯胺(TMB)10mg溶于5ml无水乙醇(或DMSO)中,临用前取出0.5ml加入10ml到底物缓冲液中,再加0.75%H2O2 32μl。

间接ELISA终止液浓硫酸10.1ml,纯化水89.9ml。

2.操作方法

样品准备将被检测血清用稀释液先做100倍稀释,然后再倍比稀释。

加样取出抗原包被板,分别加入稀释后的血清100μl,注意留有空白调零、阴性和阳性对照孔。加完样后将反应板盖好盖子置37℃作用30分钟。

洗涤倒掉孔内液体,在吸水纸上空干,每孔加满洗液,静置1-2分钟后倒掉,空干,再重复洗3次。

加酶标抗体除空白孔外,其它每孔加酶标抗体100μl,盖好盖子后置37℃作用30分钟。

加底物加底物使用液,每孔100μl,置37℃避光作用15分钟。

终止每孔加50μl终止液,使其终止反应。

3.结果判定

RA1型抗体效价用RA1型抗原包被的酶标板进行RA1型抗体效价检测。通过酶标仪测定每个孔在405nm波长的光密度值(即OD值),将OD值大于0.145的待检血清**稀释倍数,作为该血清对RA1型的抗体效价。

RA2型抗体效价用RA2型抗原包被的酶标板进行RA2型抗体效价检测。通过酶标仪测定每个孔在405nm波长的光密度值(即OD值),将OD值大于0.157的待检血清**稀释倍数,作为该血清对RA2型的抗体效价。

用5-10日龄健康易感雏鸭10羽,各颈部背侧皮下注射疫苗0.3ml,免疫后14日,连同对照鸭10羽,采血分离血清,测定RA1型、RA2型ELISA抗体效价。至少9羽免疫鸭RA1型、RA2型抗体效价不低于400。

瑞普公司鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗引进的新型菌株,使产品性能更优越,药效更显著,对防控鸭传染性浆膜炎,保护养鸭业健康发展具有重要意义。

四、免疫攻毒法

用5-10日龄健康易感雏鸭(RA1型、RA2型ELISA抗体效价均不高于100)40羽,其中20羽各颈部背侧皮下注射疫苗0.3ml,另20羽作为攻毒对照,同条件下隔离饲养。免疫后14日,取免疫鸭10羽和对照鸭10羽,腿部肌肉注射RAf63株强毒菌液0.5ml(含活菌数约1.0×108CFU);另取免疫鸭10羽和对照鸭10羽,腿部肌肉注射RAf34株强毒菌液0.5ml(含活菌数约8.0×106CFU),观察10日。各对照组鸭应全部发病,各免疫组鸭至少保护9羽。

五、使用方法及注意事项

使用方法

用于预防由血清1型和2型鸭疫里氏杆菌引起的鸭传染性浆膜炎,免疫期为2个月。颈部背侧皮下注射。5-10日龄健康雏鸭,每羽0.3ml。

注意事项

严防冻结与高温。

免疫时,应采用常规无菌操作。

仅用于健康雏鸭的免疫预防。

使用前应认真检查疫苗,如发现破损、异物、破乳等异常现象切勿使用。

使用前应将疫苗恢复至室温,并将疫苗充分摇匀,瓶口开封后限当日用完。

六、讨论

目前在中小规模的养鸭场预防鸭传染性浆膜炎疾病时的仍以抗菌药物为**,然而大剂量使用抗菌药物后,不但往往无济于事,还易产生耐药性,甚至部分鸭场出现药物中毒现象,从而进一步加强了疫病的危害。随着标准化畜牧业的发展以及食品安全的需求,对养殖业疾病的防治也提出了更高的要求,养殖过程中抗菌药物的不规范使用,使细菌的耐药性越来越严重,也成为现代化养殖必须解决的问题。为了解决细菌耐药性必须采取综合措施。“预防为主,防治结合,综合治理”是我国治疗动物性传染病的基本原则,利用疫苗预防和控制疾病是人类同传染病斗争**有效和经济的技术手段。因此,采用鸭传染性浆膜炎灭活疫苗结合生物安全控制是目前控制该病的**有效手段。

编辑:王经理

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